基金申請(qǐng)的策略和技巧

大宇

基金申請(qǐng)的策略和技巧
黎 明 濤

中山大學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)研究中心
中山大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理教研室

基金申請(qǐng)
選題

撰寫(xiě)申請(qǐng)書(shū)

答辯
撰寫(xiě)前的準(zhǔn)備
好心情、好身體  邊想邊寫(xiě)  3h /天
讀指南、讀通知  注意截止期
讀標(biāo)書(shū)、讀高手、讀同行
讀自己  賣(mài)點(diǎn)��？選題 創(chuàng)新性 工作基礎(chǔ)
想法變文字  一氣呵成   “立項(xiàng)依據(jù)”
溝通 科研科87330567、醫(yī)科處 87333055

摘  要    研究?jī)?nèi)容和意義（限400字）
1. 基礎(chǔ)：繼續(xù)和深入 發(fā)表和未發(fā)表 創(chuàng)新
2. 問(wèn)題 中肯
3. 預(yù)實(shí)驗(yàn) 針對(duì)“問(wèn)題”的預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
4. 假設(shè) 思想性、創(chuàng)新性
5. 方法 可靠性第一 先進(jìn)性第二
6. 目標(biāo) 明確、具體
7. 意義 理論性和應(yīng)用性
立  項(xiàng)  依  據(jù)
1. 關(guān)鍵! 占50% 文筆流暢、層次分明、邏輯性強(qiáng)
2. 要求：充分的理由和意義 思想性 與摘要呼應(yīng)
3. 自己的工作為依據(jù)  圖文并茂 規(guī)范
4. 參考文獻(xiàn)  時(shí)效性 自己的文章 規(guī)范化
5. 深入淺出  內(nèi)行、外行讀得懂  
6. 人文文化  素質(zhì) 精神 動(dòng)人的故事


神經(jīng)元凋亡時(shí)SP1對(duì)BH3-only蛋白Bim的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
細(xì)胞凋亡    時(shí)SP1對(duì)BH3-only蛋白Bim的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
神經(jīng)元凋亡時(shí)           BH3-only蛋白Bim的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
神經(jīng)元凋亡時(shí)SP1對(duì)BH3-only蛋白Bim的        調(diào)控
                        SP1對(duì)BH3-only蛋白Bim的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
                        SP1對(duì)神經(jīng)元凋亡的調(diào)控作用

關(guān)鍵詞：SP1/Bim /基因調(diào)控/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)/神經(jīng)元凋亡

研究?jī)?nèi)容、研究目標(biāo)與擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題
神經(jīng)元凋亡時(shí)SP1對(duì)BH3-only蛋白Bim的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
研究目標(biāo)
獲得SP1直接調(diào)控bim基因表達(dá)的可靠證據(jù)，闡明促凋亡蛋白Bim由SP1轉(zhuǎn)錄調(diào)控的新機(jī)制，為確立SP1作為神經(jīng)退行性疾病治療的新靶點(diǎn)提供更充分的科學(xué)依據(jù)。
要求：明確、具體  解決學(xué)術(shù)問(wèn)題

   研究?jī)?nèi)容 （緊緊圍繞研究目標(biāo)）
      1.  證明bim啟動(dòng)子核心區(qū)的SP1結(jié)合序列是否介導(dǎo)了bim基因的上調(diào)   為了證實(shí)bim啟動(dòng)子核心區(qū)的SP1結(jié)合序列是否介導(dǎo)了bim基因的上調(diào)，將其中的SP1結(jié)合序列進(jìn)行點(diǎn)突變，使其不能結(jié)合SP1；確定這一突變是否能夠消除bim啟動(dòng)子的撤鉀反應(yīng)。
     2.  分析SP1 是否能夠與bim啟動(dòng)子核心區(qū)的SP1結(jié)合序列結(jié)合  應(yīng)用EMSA (Electrophoretic Mobility Shift Assay)技術(shù)，證實(shí)bim啟動(dòng)子核心區(qū)的SP1 結(jié)合序列是否能夠與SP1結(jié)合；進(jìn)一步采用CHIP(Chromatin immunoprecipitation)方法，獲得SP1與bim啟動(dòng)子核心區(qū)在細(xì)胞內(nèi)結(jié)合的證據(jù)。
     3.  從 bim 的mRNA 和蛋白質(zhì)水平，觀察負(fù)顯性SP1是否能夠抑制撤鉀誘導(dǎo)的bim基因的上調(diào)  質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CGNs的轉(zhuǎn)染率只能達(dá)到0.1-1.0 %，腺病毒的感染率可達(dá)70－80%[1]。 因此，構(gòu)建dnSP1的腺病毒載體Ad-dnSP1，感染CGNs才能達(dá)到可靠分析bim的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平改變的目的。
  4. 分析SP1誘導(dǎo)Bim這一機(jī)制對(duì)神經(jīng)元凋亡的調(diào)控作用  確立SP1轉(zhuǎn)錄激活bim這一機(jī)制后，進(jìn)一步分析這一機(jī)制對(duì)神經(jīng)元凋亡的調(diào)控作用。

   擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題    獲得SP1直接調(diào)控bim基因表達(dá)的可靠依據(jù)。

    什么是關(guān)鍵問(wèn)題？
     — 研究過(guò)程中對(duì)達(dá)到預(yù)期目標(biāo)有重要影響的某些研究?jī)?nèi)容或因素。
     — 為達(dá)到預(yù)期目標(biāo)所必須掌握的關(guān)鍵技術(shù)或研究手段。



            研  究  方  案
項(xiàng)目需求為前提；
可靠性第一，先進(jìn)性第二；
參考文獻(xiàn)；
突出關(guān)鍵技術(shù)的描述；
不主張使用流程圖，建議開(kāi)頭：“有關(guān)方法、技術(shù)路線、試 驗(yàn)手段、關(guān)鍵技術(shù)綜述如下……”。


可行性分析              －從學(xué)術(shù)思想角度提出
         1.  工作基礎(chǔ) （學(xué)術(shù)思想）
        2.  科研梯隊(duì)
        3.  實(shí)驗(yàn)條件
        4.  實(shí)驗(yàn)技術(shù)
        5.  交流與合作（國(guó)內(nèi)、國(guó)外）


  研究基礎(chǔ)與工作條件   —突出與項(xiàng)目相關(guān)的工作積累
研究基礎(chǔ) 已取得的研究工作成績(jī)及與本項(xiàng)目有關(guān)的研究工作積累(對(duì)于自由申請(qǐng)項(xiàng)目，著重填寫(xiě)申請(qǐng)人近期的主要工作業(yè)績(jī)；對(duì)于重點(diǎn)項(xiàng)目，請(qǐng)著重填寫(xiě)本課題組與本項(xiàng)目相關(guān)的研究工作積累和近五年的主要研究業(yè)績(jī))
工作條件 已具備的實(shí)驗(yàn)條件，尚缺少的實(shí)驗(yàn)條件和擬解決的途徑(包括利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和部門(mén)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室的計(jì)劃與落實(shí)情況)
研究 基 礎(chǔ)
     在國(guó)家自然科學(xué)基金(已結(jié)題三項(xiàng)、正進(jìn)行一項(xiàng))的資助下，近五年有如下工作積累和成績(jī)：

    1.   SCI論文   近五年發(fā)表了14篇SCI論文；其中與神經(jīng)元凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因調(diào)控有關(guān)的論文，作為第一作者的有2篇，作為通訊作者的有4篇(見(jiàn)后)，作為共同作者的有8篇。

  2.  Bim轉(zhuǎn)錄機(jī)制的前期工作  我們首次報(bào)道了神經(jīng)元凋亡時(shí)JNK/c-Jun不參與bim的上調(diào)[1]，隨后，我們又以可靠的證據(jù)揭示了PI3K/Akt/ FKHRL1也不介導(dǎo)bim的上調(diào)(未發(fā)表資料)。這些研究工作改變了以往的觀點(diǎn),也是本項(xiàng)目重要的立項(xiàng)依據(jù)之一。


SCI 文  章
1.        Leyu Shi , Shoufang Gong, Zhongmin Yuan , Chi Ma, Yanling Liu, Chuanfu Wang , Wenming Li, Rongbiao Pi, Shoujian Huang, Ruzhu Chen , Yifan Han , Zixu Mao, and  Mingtao Li(通訊作者). Activity deprivation-dependent induction of the proapoptotic BH3-only protein Bim is independent of JNK/c-Jun activation during apoptosis in cerebellar granule neurons. Neurosci Lett. 2005, 375：7－12.
2.       Wenya Wang, Chi Ma, Zixu Mao and Mingtao Li. (通訊作者). JNK inhibition as a potential strategy in treating Parkinsons’s disease. Drug News Perspect, 2004, 17(10):646-54.
3.       Wenya Wang, Leyu Shi, Yuanbin Xie, Chi Ma, Wenming Li, Xingwen Su, Shoujian Huang, Ruzhu Chen, Zhenyu Zhu, Zixu Mao, Yifan Han and Mingtao Li. (通訊作者). SP600125, a new JNK inhibitor, protects dopaminergic neurons in the MPTP model of Parkinson’s disease.  Neurosci Res  2004；48:195-202
4.      Yuanbin Xie, Yanling Liu, Chi Ma, Zhongmin Yuan, Wenya Wang, Zhenyu Zhu, , Guoquan Gao, Xianguo Liu, Hengxin Yuan, Ruzhu Chen, Shoujian Huang, Xuelan Wang, Xiaonan Zhu, Xuemin Wang, Zixu Mao and Mingtao Li (通訊作者). Indirubin-3′-oxime inhibits c-Jun NH2-terminal kinase: anti-apoptotic effect in cerebellar granule neurons. Neurosci Lett. 2004, 367:355-359.

5.     Rongbiao Pi, Wenming Li Nelson T.K.Lee, Hugh H.N.Chan, Yongmei Pu, Ling Nga Chan, Nikolaus J.Sucher, Doanld C. Chang, Mingtao Li and Yifan Han. Minocycline prevents glutamate-induced apoptosis of cerebellar granule neurons by differential regulation of p38 and Akt pathways. J Neurochem. 2004, 91:1212-1230. Wenya Wang, Chi Ma, Zixu Mao and Mingtao Li. (通訊作者). JNK inhibition as a potential strategy in treating Parkinsons’s disease. Drug News Perspect, 2004, 17(10):646-54.
6.     Wenming Li, Rongbiao Pi, Hugh H. N. Chan, Hongjun Fu, Nelson T. K. Lee, Hing Wai Tsang, Yongmei Pu, Donald C. Chang, Chaoying Li, Jialie Luo, Keming Xiong, Zhiwang Li, Hong Xue, Paul R. Carlier, Yuanping Pang, Karl W. K. Tsim, Mingtao Li and Yifan Han. Novel dimeric AChE inhibitor Bis(7)-tacrine, but not Donepezil, prevents glutamate-induced neuronal apoptosis by blocking NMDA receptors. J Biol Chem. 2005, 280(18):18179-88.
7.     Xuemin Wang, Xiaoli Tang, Mingtao Li, John Marshall, Zixu Mao. Regulation of neuroprotective activity of myocyte enhancer factor 2 by cAMP-PKA signaling pathway in neuronal survival. J Biol Chem. 2005, 280(17):16705-13.
8.     Marcus Wiedmann, Xuemin Wang, X.iaoli Tang, Mingtao Li, Zixu Mao. PI3K/Akt-dependent regulation of the transcription factor myocyte enhancer factor-2 in insulin-like growth factor-1- and membrane depolarization-mediated survival of cerebellar granule neurons. J Neurosci Res. 2005 2005 81(2):226-234.


9.      Mingtao Li，Xiaomin Wang，Mary Kay Meintzer，Tracey Laessig，Morris J. Birnbaum and Kim A. Heidenreich.   Cyclic AMP promotes neuronal survival by phosphorylation of glycogen synthase kinase 3β. Mol Cell Biol. 2000, 20（24）：9356-9363.
10.    Mingtao Li，Daniel A. Linsenman，Melissa P.Allen，Mary Kay Meintzer， Xiaomin Wang，Tracey Laessig，Margaret E. Wierman & Kim A. Heidenreich. MEF2A and MEF2D undergo phosphorylation and caspase-mediated degradation during apoptosis of rat cerebellar granule neurons. J. Neurosci. 2001; 21(17):6544-6552.
11.   Daniel A. Linseman, Christopher M. Bartley, Shoshona S. Le, Tracey A. Laessig, Ron J. Bouchard, Mary Kay Meintzer, Mingtao Li and Kim A. Heidenreich . Inactivation of the Myocyte Enhancer Factor-2 Repressor Histone Deacetylase-5 by Endogenous Ca2/Calmodulin-dependent Kinase II  Promotes  Depolarization-mediated Cerebellar Granule Neuron Survival. J Biol Chem  2003, 278:41472–41481.
12.   Jing-Ping Yun, Choong-Tsek Liew, Eng Ching Chew, Xiao-Yu Yin, Paul Bo San Lai, Yam Hin Fai, H.K. Richard Li, Mei-Lin Jin, Ming-Xiao Ding, Mingtao Li, Han-Liang Lin, and Wan Yee Lau. Nuclear Matrix Protein Expressions in Hepatocytes of Normal and Cirrhotic Rat Livers Under Normal and Regenerating Conditions.  J Cell Biochem. 2004, 91:1269–1279.


13.  Hongwei Yang, Xiaodong Hu, Hongmei Zhang, Wenjun Xin, Mingtao Li, Tong Zhang,   Lijun Zhou and Xianguo Liu. Roles of CaMKII, PKA, and PKC in the induction and mainternance of LTP of C-fiber-evoked field potentials in rat spinal dorsal horn. J Neurophysiol. 2004, 91: 1122-1133.
14 .  Nengwei Hu, Hongmei Zhang, Xiaodong Hu , Mingtao Li, Tong Zhang,  Lijun Zhou and Xianguo Liu. Protein Synthesis Inhibition Blocks the Late-Phase LTP of C-Fiber  Evoked Field Potentials in Rat Spinal Dorsal Horn. J Neurophysiol, 2003;89:2354- 2359
15 .  Juan Sun, Mingtao Li, Jiahuai Han and Jun Gu. Sensitization of differentiated PC12 cells to apoptosis by presenilin-2 is mediated by p38. Biochem. Biophy. Res. Commun., 2001, 287: 536-541.
16.   Weibin Cai, Jianfang Ma , Chaoyang Li, Zhonghan Yang, Xia Yang, Wei Liu , Zuguo Liu , Mingtao Li, Guoquan Gao. Enhanced anti-angiogenic effect of a deletion mutant of plasminogen kringle 5 on neovascularization. J Cell Biochem. 2005 Sep 15;(in press).
17.   Ming YANG, Cun-you WAGN, Feng ZHOU, Jing TAO, Tao LIU, Hai-yan WEI, Wei LIU, Ming-tao Li, Xian-song FENG.  Proteomic Analysis in the Early Process of Pancreatic Regeneration in the Pancreatectomized Rat.  Acta Pharmacologica Sinica 2005 (in press)
工 作 條 件
         2001年回國(guó)，獲得211基金180萬(wàn)元，組建了一流的分子、細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室。2002年，作為負(fù)責(zé)人獲得一期985學(xué)科建設(shè)經(jīng)費(fèi)700萬(wàn)元，籌建了一流的蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)室并正在主持開(kāi)展蛋白質(zhì)科學(xué)的前沿性工作。近三年，培養(yǎng)和匯聚了一支從事分子神經(jīng)生物學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)研究的科研隊(duì)伍。 這些建設(shè)性工作為解決細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因調(diào)控以及本項(xiàng)目的核心問(wèn)題奠定了扎實(shí)的基礎(chǔ)。
      項(xiàng)目負(fù)責(zé)人黎明濤所在單位——中山大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理教研室是211項(xiàng)目資助學(xué)科和國(guó)家重點(diǎn)學(xué)科。人才濟(jì)濟(jì)，科研裝備精良。近三年，藥理教研室獲得學(xué)科建設(shè)資金3000萬(wàn)元，已購(gòu)置大型儀器如質(zhì)譜儀、激光共聚焦顯微鏡、超速離心機(jī)、流式細(xì)胞儀、高效液相和蛋白質(zhì)分離純化系統(tǒng)等。這是申請(qǐng)者視為非�？少F的研究工作環(huán)境。
申請(qǐng)者簡(jiǎn)歷
申請(qǐng)者和項(xiàng)目組主要成員
學(xué)歷
研究工作簡(jiǎn)歷
近期已發(fā)表與本項(xiàng)目有關(guān)的文章目錄
獲得學(xué)術(shù)獎(jiǎng)勵(lì)情況
在本項(xiàng)目中承擔(dān)的任務(wù)。


   黎明濤 (Li Mingtao)
              項(xiàng)目負(fù)責(zé)人，中山大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理教研室教授，博士生導(dǎo)師，中山醫(yī)學(xué)院蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)室主任。于1984年、1989年和1996年分別獲得醫(yī)學(xué)學(xué)士、碩士和博士學(xué)位。
              主要研究領(lǐng)域是神經(jīng)元凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因調(diào)控和蛋白質(zhì)組學(xué)。在美國(guó)Department of Pharmacology, University of Colorado Health Sciences Center從事兩年博士后研究（1999-2001），主攻凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因調(diào)控和蛋白質(zhì)組學(xué)。
              近五年發(fā)表了14篇SCI論文，其中：作為第一作者，在國(guó)際核心雜志Molecular and Cellular Biology(Impact Factor, 10.03)和 Journal of Neuroscience(IF, 8.4)發(fā)表了具有創(chuàng)新性的文章；作為通訊作者，最近在Neurosci Res(IF, 2.4) 和Neurosci Lett（IF，2.2）等期刊上發(fā)表了開(kāi)拓性的文章。近五年（1998－2004）作為第一主持人獲得13項(xiàng)基金，包括：4項(xiàng)國(guó)家自然科學(xué)基金；5項(xiàng)省自然科學(xué)基金；3項(xiàng)市基金；1項(xiàng)教育部基金。
    發(fā)表的相關(guān)論文
      1. Leyu Shi , Shoufang Gong, Zhongmin Yuan , Chi Ma, Yanling Liu, Chuanfu Wang , Wenming Li, Rongbiao Pi, Shoujian Huang, Ruzhu Chen , Yifan Han , Zixu Mao, and  Mingtao Li(通訊作者). Activity deprivation-dependent induction of the proapoptotic BH3-only protein Bim is independent of JNK/c-Jun activation during apoptosis in cerebellar granule neurons. Neurosci Lett. 2005, 375:7－12.
   2. ……
   3. ……


     皮榮標(biāo)(Pi Rongbiao)
               33歲，博士學(xué)位，講師。2002年畢業(yè)于中山大學(xué)，獲神經(jīng)藥理學(xué)博士。同年赴香港科技大學(xué)生物化學(xué)系從事博士后研究，現(xiàn)在中山大學(xué)藥學(xué)院任講師。主要研究興趣涉及神經(jīng)保護(hù)藥物的作用及其機(jī)制的研究。曾負(fù)責(zé)或參加包括國(guó)家自然科學(xué)基金等多項(xiàng)研究。已發(fā)表或待發(fā)表論著近20篇，其中SCI論文5篇。
              皮博士與本人合作達(dá)11年，有共同的研究趣向，作為共同作者發(fā)表多篇SCI論文。他掌握了本項(xiàng)目涉及的大部分實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)，尤其在腺病毒載體構(gòu)建方面積累了經(jīng)驗(yàn)（見(jiàn)文章）。主要負(fù)責(zé)腺病毒載體構(gòu)建等工作。
     發(fā)表的相關(guān)論文
      1. Rongbiao Pi, Wenming Li, Nelson T.K.Lee, Hugh H.N.Chan, Yongmei Pu, Ling Nga Chan, Nikolaus J. Sucher, Doanld C. Chang, Mingtao Li and Yifan Han. Minocycline prevents glutamate-induced apoptosis of cerebellar granule neurons by differential regulation of p38 and Akt pathways. J Neurochem. 2004, 91:1212-1230.
     2. ……
     3. ……


申請(qǐng)項(xiàng)目同行評(píng)議意見(jiàn)反饋信
     黎明濤先生：   
             您好！您申請(qǐng)的項(xiàng)目經(jīng)專(zhuān)家投票表決，同意資助。關(guān)于你的項(xiàng)目的同行評(píng)議意見(jiàn)如下： 1.    本項(xiàng)目在小腦顆粒細(xì)胞撤鉀的離體凋亡模型中，發(fā)現(xiàn)了一種直接調(diào)節(jié)Bim的新轉(zhuǎn)錄因子SP1，申請(qǐng)人試圖采用腺病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)、基因突變以及分子生物學(xué)方法進(jìn)一步論證SP1是直接調(diào)控bim基因的這一假說(shuō)。立項(xiàng)具有前言性，申請(qǐng)人工作基礎(chǔ)好，并與美國(guó)Emory大學(xué)、香港大學(xué)有長(zhǎng)期的合作條件，完全能夠完成本項(xiàng)課題。建議優(yōu)先資助。 2.    本項(xiàng)課題的立項(xiàng)依據(jù)較為充分，具有一定的學(xué)術(shù)創(chuàng)新及科學(xué)意義。研究?jī)?nèi)容明確、技術(shù)路線清晰、研究方法和方案可行。申請(qǐng)者有較高的學(xué)術(shù)水平，以及多次主持國(guó)家自然科學(xué)基金課題的經(jīng)驗(yàn)。同時(shí)，申請(qǐng)者所在單位又有比較好的實(shí)驗(yàn)室及條件。建議給予資助。 3.    課題研究具有較好的工作基礎(chǔ)，研究具有較高的學(xué)術(shù)價(jià)值，建議資助。 4.    同意資助。理由：該項(xiàng)目立論依據(jù)充分，其重要的意義表現(xiàn)在澄清撤鉀誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡時(shí)，Bim上調(diào)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。申請(qǐng)者有較好的研究基礎(chǔ)和研究能力，項(xiàng)目的內(nèi)容設(shè)置合適，重點(diǎn)突出，總體方案合理，技術(shù)路線可行，可資助。 5.     This is a nicely writen proposal with a clear aim and practical approaches. Further, the group has published results related to the current proposal, indicating the ability of the group to perform the experiments. 
獲得資助的決定因素
工作基礎(chǔ)好
學(xué)術(shù)創(chuàng)新性及學(xué)術(shù)價(jià)值
立項(xiàng)依據(jù)充分
研究?jī)?nèi)容明確
技術(shù)路線清晰
重點(diǎn)突出、方案合理
國(guó)際合作

祝大家新年快樂(lè)！  在新的一年獲得更多基金！
基金答辯
充滿自信、激情
儀表和體語(yǔ)
特點(diǎn)： 專(zhuān)家心理？按提前結(jié)束做準(zhǔn)備！
準(zhǔn)備充分     幻燈 小道具
口頭表達(dá)     準(zhǔn)確性、情感性、可信性和簡(jiǎn)明性
開(kāi)門(mén)見(jiàn)山、突出主題    做什么？為什么？怎樣做？
突出特色和創(chuàng)新


帕金森病治療的新靶點(diǎn)及靛玉紅衍生物的研究與開(kāi)發(fā)
黎   明   濤
中山大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院



以JNK為靶治療PD
1. 保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元

2. 改善行為學(xué)指標(biāo)

3. 提高黑質(zhì)多巴胺濃度



以JNK/CDK5/GSK3β為靶治療PD
       JNK          Neurosci Res 2004, 48:195-202
                                     Drug News Perspect.2004 17(10):646-54
       GSK3β   Mingtao Li, et al,  unpublished data
           CDK5      PNAS USA 2003,100(23):13650-5

抑制JNK/CDK5/GSK3β的方案
   1.三種抑制劑聯(lián)合
   2.一種抑制劑，“一石三鳥(niǎo)”

Indirubin-3'-oxime（靛玉紅衍生物）
是CDK5、GSK-3β的抑制劑
Nat Cell Biol. 1999 1(1):60-7
J Biol Chem. 2001, 5;276(1):251-60





研究目標(biāo)

   以JNK/CDK5/GSK3β為明確靶點(diǎn)，以靛玉紅衍生物為抑制劑, 研發(fā)出一類(lèi)毒性小、特異性高、作用強(qiáng)的治療PD的新藥物
研究?jī)?nèi)容
1. 篩選對(duì)JNK具有特異性抑制作用的靛玉紅衍生物 (11個(gè)）
2. 篩選對(duì)黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元凋亡具有保護(hù)性干預(yù)作用的靛玉紅衍生物 （8個(gè)）
3. 篩選對(duì)PD具有治療作用的衍生物 （4個(gè)）
4. 藥理、毒理研究
研究基礎(chǔ)
1. 首次證實(shí)JNK是治療PD的有效靶點(diǎn)
2.  證實(shí)GSK-3β是治療PD的靶點(diǎn)之一
3. 發(fā)現(xiàn)靛玉紅衍生物能夠抑制JNK，對(duì)PD具有治療作用
4. 15篇相關(guān)SCI文章

發(fā)表文章補(bǔ)充
Wiedmann M, Wang X, Tang X, Han M, Li M, Mao Z.         J Neurosci Res. 2005 Jun 1 [Epub ahead of print]
Wang X, Tang X, Li M, Marshall J, Mao Z.  J Biol Chem. 2005, 280(17):16705-13.
Li W, Pi R, Chan HH, Fu H, Lee NT, Tsang HW, Pu Y, Chang DC, Li C, Luo J, Xiong K, Li Z, Xue H, Carlier PR, Pang Y, Tsim KW, Li M, Han Y.   J Biol Chem. 2005, 280(18):18179-88.
創(chuàng) 新 點(diǎn)
       1. 首次證實(shí)JNK是治療PD的有效靶點(diǎn)
       2.  證實(shí)GSK-3β是治療PD的靶點(diǎn)之一
       3. 發(fā)現(xiàn)靛玉紅能夠抑制JNK，對(duì)PD具有治療作用
       4. JNK/CDK5/ GSK-3β為靶治療PD
       5. 用一種化合物抑制JNK/CDK5/ GSK-3β



我們對(duì)完成此項(xiàng)目充滿信心！
謝   謝！

參 考 文 獻(xiàn)
1.  Leyu Shi , Shoufang Gong, Zhongmin Yuan , Chi Ma, Yanling Liu,Chuanfu Wang , Wenming Li, Rongbiao Pi, Shoujian Huang, Ruzhu Chen , Yifan Han , Zixu Mao, and  Mingtao Li. Activity deprivation-dependent induction of the proapoptotic BH3-only protein Bim is independent of JNK/c-Jun activation during apoptosis in cerebellar granule neurons. Neurosci Lett. 2005, 375：7－12.
2. Wenya Wang, Leyu Shi, Yuanbin Xie, Chi Ma, Wenming Li, Xingwen Su, Shoujian Huang, Ruzhu Chen, Zhenyu Zhu, Zixu Mao, Yifan Han and Mingtao Li. SP600125, a new JNK inhibitor, protects dopaminergic neurons in the MPTP model of Parkinson’s disease.  Neurosci Res  2004；48:195-202
實(shí)事求是、追求真理的人文精神
             Dr. Jonathan Ham以撤NGF的交感神經(jīng)元為模型觀察到JNK/c-Jun[10]和PI3K/Akt/ FKHRL1通路參與Bim的上調(diào)[12]，而我們以撤鉀處理CGNs為模型觀察到，這兩條通路不參與Bim的上調(diào)。顯然，我們的研究結(jié)果不支持Dr. Ham的結(jié)論。但是，Dr.  Ham讀了我們的文章初稿之后，在提出中肯意見(jiàn)的同時(shí)，稱(chēng)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果非常清楚并對(duì)我們的上述結(jié)論表示認(rèn)同(Overall your results are clear and suggest that altering the KCl concentration in CGNs induces the bim promoter by a mechanism that does not involve JNK / c-Jun or FOXO factors)。Dr.  Ham這種嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度令人欽佩，值得學(xué)習(xí)（尊敬的評(píng)審專(zhuān)家，如有必要，本人可以將Dr. Ham的Email原件轉(zhuǎn)發(fā)給您）。

工作基礎(chǔ) ：   
          本項(xiàng)目是在原工作基礎(chǔ)上的繼續(xù)和深入。近五年，本人共發(fā)表了12篇SCI論文，其中作為第一作者兩篇；通訊作者四篇（見(jiàn)工作基礎(chǔ)）。研究方向主要集中在神經(jīng)元凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因調(diào)控。本課題組在研究JNK/c-Jun通路靶基因時(shí),發(fā)現(xiàn)“促凋亡蛋白bim上調(diào)不依賴(lài)JNK/c-Jun”。我們首次報(bào)道了神經(jīng)元凋亡時(shí)JNK/c-Jun不參與bim的上調(diào)[1]，隨后，我們又以可靠的證據(jù)揭示了PI3K/Akt/ FKHRL1也不介導(dǎo)bim的上調(diào)(未發(fā)表資料)。最近，對(duì)bim的調(diào)控研究又取得了突 破性的進(jìn)展，即發(fā)現(xiàn)了SP1調(diào)控bim的轉(zhuǎn)錄機(jī)制(見(jiàn)立項(xiàng)依據(jù))。這些研究工作改變了以往的觀點(diǎn),也是本項(xiàng)目重要的立項(xiàng)依據(jù)之一。因此，我們具有完成本項(xiàng)目的切實(shí)可行的、扎實(shí)的前期工作基礎(chǔ)。


負(fù)顯性SP1腺病毒(Ad-dnSP1)載體的構(gòu)建、擴(kuò)增、純化和保存
基本方法

      大鼠小腦顆粒神經(jīng)元培養(yǎng)、Western blot、RT－PCR、鈣磷沉淀法轉(zhuǎn)染基因、轉(zhuǎn)基因神經(jīng)元的凋亡分析、報(bào)道基因表達(dá)分析、免疫沉淀等基本方法均按我們報(bào)道[1, 2, 3, 4, 5, 6]的進(jìn)行。